Grundprincipen för DNA-syntes

Den kemiska DNA-syntesen är baserad på fastfassyntesstrategin och fosforamiditkemi.Till skillnad från den biologiska DNA-syntesen är materialet i kemisk DNA-syntes DMT (4, 4-dimetoxitrityl) och fosforamiditmodifierad deoxiriboxisid, som visas i figur 1. DNA-syntesen utförs på det fasta underlaget (vi kan erbjuda olika avOligosynteskolonn), dvs CPG (kontrollerat porglas) och PS (polystyren), och hela syntesen utförs på enDNA/RNA-syntes, som är vår huvudutrustning, har olika modeller såsom: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 och etc, syntesriktningen är från 3' till 5', och en nukleotid introduceras till det fasta underlaget via en syntescykel.En typisk syntescykel innehåller fyra steg, avskyddning, koppling, täckning och oxidation (Figur 2).Avskyddningen är inställd för att ta bort DMT-gruppen på det fasta underlaget eller 5'-hydroxylgruppen på den tidigare nukleosiden, den 3% triklorättiksyran i diklormetan används som avskyddningsreagens.Sedan tilläts den fosforamiditmodifierade deoxiriboxisiden att exponera hydroxylgruppen med hjälp av aktivator, dvs 5-etyltiotetrazol eller 4,5-dicyanoimidazol, vilket bildade fosfitetriestern (III), och realiserade kopplingssteget.Ett kapningssteg utförs för att blockera den oreagerade hydroxylgruppen under kopplingssteget, för att minimera bildningen av oönskade defektsekvenser.Slutligen oxideras den instabila fosfitetriestern (III) till kemisk stabil fosfortriester (V) med jod som oxidationsmedel i närvarande pyridin.

Det syntetiserade DNA:t kan klyvas från det fasta underlaget genom aminolys, den 2-cyanoetylskyddade gruppen på fosfortriestern och amiden på nukleobasen klyvs samtidigt, syntesplattorna och synteskolonnerna i ställen placeras direkt i reaktionskammaren avAvskyddsutrustning.Rå-DNA kan framställas med HPLC, elektrofores och OPC på begäran, vi kan också tillhandahålla digReningsutrustningför efterbearbetning.